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BLU新視野 | Jurkat細(xì)胞精準(zhǔn)計(jì)數(shù)為何屢成瓶頸？
Jurkat細(xì)胞是人急性T淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL）來(lái)源的懸浮細(xì)胞系，1970年代由Schneider建立。因保留了完整的T細(xì)胞受體（TCR）-CD3復(fù)合體及下游信號(hào)分子，它成為全球研究T細(xì)胞活化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞因子分泌以及病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的“黃金模型"。
Jurkat細(xì)胞直徑約14–16 μm，呈懸浮生長(zhǎng)，極易自發(fā)或剪切誘導(dǎo)，聚集成團(tuán)；活細(xì)胞邊緣折光性強(qiáng)，死細(xì)胞則迅速皺縮，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示為一深一淺，肉眼判斷的主觀誤差較大，計(jì)數(shù)重復(fù)性低。此外，其核型復(fù)雜（假三倍體），在長(zhǎng)期傳代中可能出現(xiàn)亞克隆漂移，因此實(shí)驗(yàn)前需同步檢定細(xì)胞活率、濃度及關(guān)鍵表面標(biāo)記（如CD3、CD28）。
對(duì)于Jurkat細(xì)胞的精準(zhǔn)計(jì)數(shù)一直是個(gè)難題。傳統(tǒng)技術(shù)方法如血球計(jì)數(shù)板，只能選取部分視野，且人眼計(jì)數(shù)有限，因此，手動(dòng)計(jì)數(shù)的誤差通常＞15%，這對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果以及實(shí)驗(yàn)整體的可重復(fù)性都帶來(lái)了極大的影響。
為了應(yīng)對(duì)這一計(jì)數(shù)難題，我們使用了Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀，調(diào)整并測(cè)試了Jurkat細(xì)胞計(jì)數(shù)的最佳參數(shù)，快速得到了較為精準(zhǔn)，可重復(fù)的計(jì)數(shù)結(jié)果。
實(shí) 驗(yàn)
在使用Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀時(shí)，大多數(shù)細(xì)胞可以使用默認(rèn)的儀器設(shè)置進(jìn)行分析。在某些情況下，某些細(xì)胞系可能需要修改這些分析參數(shù)。Vi-CELL BLU自帶的軟件允許用戶直觀且輕松地選擇最佳的儀器設(shè)置，從而確保準(zhǔn)確的結(jié)果。用于Jurkat細(xì)胞分析的儀器設(shè)置如下（圖1）。
圖1：用于Jurkat細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀的參數(shù)設(shè)置
結(jié) 果
Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀報(bào)告的結(jié)果如圖2所示。細(xì)胞活率百分比和總Jurkat細(xì)胞濃度分別為91.5%和8.99 x 10^6 cells/mL。Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀還報(bào)告活細(xì)胞濃度、平均細(xì)胞直徑、大小分布和平均細(xì)胞圓形度。每次測(cè)量技術(shù)的細(xì)胞圖像也可以存檔，以供將來(lái)重新分析。
圖2：活細(xì)胞用綠色圓圈表示，非活細(xì)胞用紅色圓圈表示
結(jié) 論
對(duì)于高密度、易聚團(tuán)或形態(tài)不均一的懸浮細(xì)胞系，Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀能夠消除人為偏差，提升數(shù)據(jù)一致性并消除手動(dòng)計(jì)數(shù)中固有的主觀性，并且拍照多個(gè)視野，與手動(dòng)計(jì)數(shù)相比，有≥10?的樣本量來(lái)降低統(tǒng)計(jì)誤差。此外，每次計(jì)數(shù)的結(jié)果都會(huì)輸出可追溯圖像，滿足GLP要求。
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